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基因工程產(chǎn)品 IPTG
貨號：I8070
規(guī)格：1g/5g/100g

• 英文名稱：IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )

• 別名：Isopropyl-β-D-Thiogalactoside；IPTG

• CAS：367-93-1

• 分子式：C9H18O5S

• 分子量：238.31

• 儲存條件：2-8℃

• 純度：≥99.0%

• 外觀（性狀）：白色結(jié)晶性粉末

• 單位：瓶

異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一種作用*的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。當(dāng)有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)b－半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。
實(shí)驗(yàn)方案
1、外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)
( 1 ）用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶消化載體DNA 和目的基因。
( 2 ）按連接步驟連接目的基因和載體，并轉(zhuǎn)化到相應(yīng)的宿主菌。
( 3 ）篩選出含重組子的轉(zhuǎn)化菌落，提取質(zhì)粒DNA 作限制性內(nèi)切核酸酶圖譜，DNA 序列測定確定無誤后進(jìn)行下一步。
( 4 ）如果表達(dá)載體的原核啟動子為PL 啟動子，則在30 -32 ℃ 培養(yǎng)數(shù)小時，使培養(yǎng)液的OD600達(dá)0.4-0.6 ，迅速使溫度升42 ℃ 繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h ；如果表達(dá)載體的原核啟動子為tac 等，則37 ℃培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)小時達(dá)到對數(shù)生長期后加IPTG 終濃度為1 mmol / L。繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h 。
( 5 ）取上述培養(yǎng)液1 mL , 1000g 離心，1 min ，沉淀，加100 μL 聚丙烯酰胺凝膠電泳上樣緩沖液后，作SDS -PAGE 檢測。
2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白質(zhì)純化
1 ）細(xì)菌的裂解
常用方法有：① 高溫珠磨法；② 高壓勻漿；③ 超聲破碎法；④ 酶溶法；⑤ 化學(xué)滲透等。前三種方法屬機(jī)械破碎法，并且方法① 、② 已在工業(yè)生產(chǎn)中得到應(yīng)用，后三種方法在實(shí)驗(yàn)室研究中應(yīng)用較為廣泛。下面介紹酶溶法和超聲破碎法的實(shí)驗(yàn)步驟。
（1）酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶；β-1,3 -葡聚糖酶；β-1,6 -葡聚糖酶；蛋白酶；殼多糖酶；糖昔酶等。溶菌酶主要對細(xì)菌類有作用，而其他幾種酶對酵母作用顯著。
主要步驟為：
① 4 ℃ ，5000rpm 離心，15 min ，收集誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)菌培養(yǎng)液（100 mL ）。棄上清，約每克濕菌加3 mL 裂解緩沖液，懸浮沉淀。
注意事項(xiàng)：培養(yǎng)噬菌體時，Top agar中的添加量為：25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有IPTG的培養(yǎng)基4℃避光保存，須在1~2 周內(nèi)使用。
保存：IPTG要2-8°C冷藏保存，配制好后保存于-20°C，室溫可放置一個月。遠(yuǎn)離熱源及氧化劑。

    異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導(dǎo)物，X-gal為生色底物，二者共同用于藍(lán)白斑篩選。IPTG可誘導(dǎo)載體lac操縱子DNA區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，該片段可與宿主細(xì)胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實(shí)現(xiàn)基因內(nèi)互補(bǔ)(α互補(bǔ))。實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)的細(xì)菌暴露IPTG，鋪在含有X-gal生色底物的培養(yǎng)基上，可形成藍(lán)色菌落。外源DNA插入質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)后可破壞α互補(bǔ)作用,將產(chǎn)生白色菌落。

特性：純度 ：≥99.0% (TLC) 熔點(diǎn)：110-114℃

濕度(%)：≤1.0 pH (5%, 水)25℃：5-7

比旋光度 (1%, 水)：-34.0--29.0

溶解性：IPTG貯存液，先在8ml蒸餾水中溶解2g，定溶10ml，用0.22um濾器過濾除菌，貯存于-20℃。 

基因工程產(chǎn)品 IPTG

參考文獻(xiàn)：

《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate from glucose and CO2》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang, Jun Liu, Yan Wang, Changhao Bi, Xueli Zhang 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30691454

《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate by increasing the intracellular FAD pool》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang,Xueli Zhang,Changhao Bi 期刊:Biochemical Engineering Journal 影響因子:3.371 PMID:

《Identification of the O-GalNAcylation site(s) on FOXA1 catalyzed by ppGalNAc-T2 enzyme in vitro》 作者:Siqi Zhang,Lijuan,Bai,Qiushi Chen,Yan Ren,Keren Zhang,Qiong Wu,Huang Huang,Wenli Li ,Yan Zhang,Jianing Zhang,Yubo Liu 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影響因子:2.705 PMID:31029427